Аффинная хроматография с иммобилизованными ионами металлов (IMAC), разработанная Поратом (1), основана на взаимодействии определенных белковых остатков (гистидинов, цистеинов и в некоторой степени триптофана) с катионами переходных металлов.
Кобальт-хелатирующая смола специально разработана для очистки белков, которые связываются с ионами кобальта, включая белки, меченные 6-кратным гистидином. Хотя белки, меченные 6 X His, связываются с несколько меньшей эффективностью по сравнению с никель-хелатирующей смолой, неспецифическое связывание значительно снижается. Кобальтовые смолы обладают более высокой селективностью в отношении поли-His-последовательностей, однако имеют низкую загрузочную способность, поэтому кобальтовую хелатирующую смолу следует использовать для ценных рекомбинантных белков в ограниченных количествах.
Иммобилизованная металлическая смола для аффинной хроматографии (IMAC) с использованием кобальта (Co2+) для очистки белков, меченных 6x гистидином.
Эта смола связывается с шестью остатками гистидина (6x His), обычной меткой, используемой при очистке белков. Смола состоит из иминодиацетата, связанного с 6% сшитыми агарозными шариками. Иминодиацетат связывает двухвалентный ион кобальта с емкостью 20-40 мкмоль Co2+/мл смолы. Белковосвязывающая способность составляет >50 мг белка на мл смолы. Мы продемонстрировали связывание> 100 мг белков, меченных 6XHis, массой 50 кДа с мл смолы.
Спин-колонки поставляются с объемом слоя смолы 0,2, 1 и 3 мл при общем объеме колонки 1, 8 и 22 мл соответственно. Колонки можно использовать в качестве спин-формата гравитационных колонок.
Также доступны иммобилизованные никелевые, медные и цинкхелатные смолы. Кобальт имеет самую высокую селективность, за ним следуют цинк, никель, затем медь, но у него самая низкая нагрузочная способность. Медь имеет самую высокую нагрузочную способность, за ней следует никель, затем цинк.
Доступны специфические буферы для связывания/промывки и элюирования.
Наши новые наборы для очистки белков HOOK™ 6X His теперь доступны и включают в себя все необходимое для очистки белков, меченных 6X His, из дрожжей или бактерий, включая буферы для лизиса, литические ферменты, смолу, колонки и буферы для связывания, промывки и элюирования. Каждый комплект доступен с никелевыми или кобальтовыми хелатными смолами. Доступные комплекты:
HOOK™ 6X Очистка белка His (бактерии): Выделение из бактерий; оптимизирован для получения до 10 мг/250 мл культуры растворимого белка, меченного 6X His.
HOOK™ 6X His Белковая спиновая очистка (бактерии): выделение из бактерий; оптимизировано для получения культуры ~1 мг/50 мл растворимого 6X His-меченного белка
HOOK™ 6X Очистка белка His (дрожжи): Выделение из дрожжей; оптимизирован для получения до 10 мг растворимого белка, меченного 6X His.
HOOK™ 6X Очистка спина белка His (дрожжи): Выделение из дрожжей; оптимизирован для получения до 1 мг растворимого белка, меченного 6X His.
Нажмите здесь, чтобы запросить оптовые или нестандартные размеры.
Особенности
- Для очистки кобальтсвязывающих белков, включая 6 белков His.
- Высокая емкость: >50 мг/мл
- Плотность лиганда: 20–40 Ммоль Co2+/мл смолы.
- Структура гранул: 6% сшитой агарозы.
Приложения
- Аффинная очистка кобальтсвязывающих белков
- Аффинная очистка белков с помощью 6-кратной His-метки.
| Описание |
Размер |
Кат. номер |
| Кобальт-хелатирующая смола |
10 мл смолы |
786-286 |
| Кобальт-хелатирующая смола |
100 мл смолы |
786-402 |
| Кобальт-хелатирующая смола |
500 мл смолы |
786-403 |
| Кобальт-хелатирующая смола, центрифугирующая колонка 0,2 мл |
25 столбцов |
786-454 |
| Кобальт-хелатирующая смола, центрифугирующая колонка 1 мл |
5 столбцов |
786-455 |
| Кобальт-хелатирующая смола, центрифугирующая колонка объемом 3 мл |
5 столбцов |
786-456 |
| Кобальт-хелатирующая смола |
2 x 500 мл смолы
Иммобилизованный белок А |
786-600 |