HOOK™ Выделение белков клеточной поверхности G-Biosciences 786-316

HOOK™ используется технология маркировки и очистки биотина G-Biosciences HOOK™ в сочетании с нашим буфером для лизиса клеток млекопитающих PE LB™, позволяющим удобно маркировать белки клеточной поверхности и изолировать их для дальнейшего анализа, включая вестерн-блоттинг.

Клетки млекопитающих, прикрепившиеся или неприкрепившиеся, сначала метят HOOK™ сульфо-NHS-SS-биотином. HOOK™ Сульфо-NHS-SS-биотин представляет собой водорастворимый реагент для биотинилирования, реагирующий с амином, который содержит сложный эфир N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-NHS) (см. таблицу). Добавление заряженного сульфоната (SO3-) к N-гидроксисукцинимидному кольцу сложных эфиров сульфо-NHS приводит к его растворимости в воде, но предотвращает проникновение через плазматические мембраны. Растворимость и непроницаемость для плазматических мембран делает HOOK™ сульфо-NHS-SS-биотин идеальным для изучения белков клеточной поверхности, поскольку он реагирует только с белковыми молекулами на внешней поверхности плазматических мембран. Дополнительным преимуществом HOOK™ сульфо-NHS-SS-биотина является наличие дисульфидной связи в спейсерном плече. Дисульфидная связь позволяет отщепить биотиновый фрагмент от белка, делая его взаимодействие с авидином/стрептавидином обратимым. После маркировки клетки лизируют с помощью Mammalian Cell PE LB™, забуференного лизирующего раствора, в котором используется мягкий неионогенный детергент для усиления экстракции и стабильности белков, а клеточный лизат наносят на колонку со стрептавидином и агарозой. Немеченые внутриклеточные белки вымываются, а меченные биотином белки клеточной поверхности затем высвобождаются за счет восстановления дисульфидной связи с помощью DTT.

HOOK™ сульфо-NHS-SS-биотин

MOLECULAR WEIGHT: 606.69

SPACER ARM (?): 24.3

REACTIVE GROUP:сульфо-NHS-эфир

MEMBRANE PERMEABLE:NO

WATER SOLUBLE:YES

CLEAVABLE/ REVERSIBLE:YES

REACTIVE pH:7-9

После маркировки клетки лизируют с помощью Mammalian Cell PE LB™, забуференного лизирующего раствора, в котором используется мягкий неионогенный детергент для усиления экстракции и стабильности белков, а клеточный лизат наносят на колонку со стрептавидином и агарозой. Немеченые внутриклеточные белки вымываются, а меченные биотином белки клеточной поверхности затем высвобождаются за счет восстановления дисульфидной связи с помощью DTT.

В комплект входят все необходимые реагенты и буферы для удобства и улучшения воспроизводимости. Набор совместим с широким спектром клеток млекопитающих и может использоваться для сравнения обработанных и необработанных клеток, а также различий между различными клеточными линиями. Этот набор поставляется с достаточным количеством реагентов для пяти экспериментов, каждый из которых состоит из четырех 90-95% сливающихся Т-75см.2колбы.

Особенности

• Полная маркировка и выделение биотина на клеточной поверхности.
• Подходит для широкого спектра клеток млекопитающих.

Приложения

• Для выделения белков клеточной поверхности.
• Для изучения перемещения клеток на поверхности.
• Для изучения взаимодействий рецептор:лиганд.

Описание	Размер	Кат. номер
HOOK™ Выделение белков клеточной поверхности	5 реакций	786-316