HOOK™ IgG Биотиниальтион (сульфгидрил) G-Biosciences 786-729

Биотинилирование простых антител

Набор HOOK™ для биотинилирования IgG (сульфгидрил) предназначен для эффективного биотинилирования молекул IgG путем иммобилизации молекул IgG на твердой подложке (рис. 1).

Молекулы IgG содержат богатую гистидином область в своей Fc-области, и эта особенность используется для первой иммобилизации молекул IgG на подложке из никель-хелатирующей смолы. Дисульфидные связи иммобилизованной молекулы IgG затем восстанавливаются с помощью прилагаемого Protein-S-S-Reductant™, при этом избыток восстановителя просто смывается. Восстановленную иммобилизованную молекулу IgG затем инкубируют с раствором PEG2-Iodoacetyl-Biotin для биотинилирования свободных сульфгидрильных групп. Свободный PEG2-Iodoacetyl-Biotin смывают, а биотинилированный IgG элюируют буфером, содержащим имидазол. Биотинилирование IgG на никель-хелатирующей смоле приводит к добавлению 2-4 молекул биотина на молекулу IgG.

Набор HOOK™ IgG для биотинилирования (сульфгидрил) имеет преимущество перед стандартными реакциями биотинилирования, поскольку иммобилизация на никель-хелатирующей смоле позволяет быстро удалить несвязанный биотин и, следовательно, устраняет необходимость в дальнейшем диализе или обессоливании биотинилированного антитела.

Биотин, молекула массой 244 Да, проявляет исключительную аффинность связывания с авидином и стрептавидином (Ka=1015 M-1). Биотинилированные молекулы эффективно исследуются с помощью авидина или стрептавидина, конъюгированного с репортерными молекулами, такими как пероксидазы или фосфатазы. Популярным методом является использование меченных биотином белков в ELISA, вестерн-блоттинга и дот-блоттинга.

В комплект поставки входит колонка для хелатирования никеля, которую можно регенерировать до 10 раз, и наши одноразовые аликвоты PEG2-Iodoacetyl-Biotin. PEG2-Iodoacetyl-Biotin представляет собой сульфгидрильный реактивный реагент биотинилирования, который реагирует с тиоловыми группами при pH 7,5-8,5 и образует стабильные тиоэфирные связи. PEG2-Iodoacetyl-Biotin растворим в воде благодаря спейсеру из полиэтиленгликоля (PEG). Для специфической реакции с сульфгидрилами ограничьте реакцию pH 7,5–8,5 и молярным соотношением йодацетилбиотина к белку таким образом, чтобы концентрация биотина лишь немного превышала концентрацию сульфгидрила. Йодоацетильную реакцию следует проводить в темноте, чтобы ограничить образование свободного йода, который может вступать в реакцию с остатками тирозина, триптофана и гистидина.

Преимущество использования реагента для биотинилирования PEG (полиэтиленгликоль) заключается в том, что длинный гидрофильный спейсер передает свою растворимость в воде молекуле, с которой он связан. Это означает, что антитела и другие белки, меченные нашими PEG2-Iodoacetyl-Biotin, имеют меньшую вероятность агрегации по сравнению с реакциями биотинилирования, не относящимися к PEG. HOOK™ Набор для биотинилирования IgG (сульфгидрил) предназначен для связывания 1–10 мг белка в 1 мл буфера, подходит для 8 связываний.

Также имеется: HOOK™ Биотинилирование IgG (амин) для биотинилирования первичных аминов.

Особенности

• Более простое биотинилирование антител
• Технология Solid Support исключает очистку от диализа/обессоливания антител
• Подходит для антител 1–10 мг.
• PEG Биотиновый реагент для уменьшения стерических затруднений и повышения растворимости меченых антител.

Приложения

• Для эффективного и простого мечения антител биотином.