HOOK™ Биотинилирование IgG (амин) G-Biosciences 786-728

Биотинилирование простых антител

Набор HOOK™ для биотинилирования (аминов) IgG предназначен для эффективного биотинилирования молекул IgG путем иммобилизации молекул IgG на твердой подложке (см. рисунок 1).

Молекулы IgG содержат богатую гистидином область в своей Fc-области, и эта особенность используется для первой иммобилизации молекул IgG на подложке из никель-хелатирующей смолы. Иммобилизованную молекулу IgG затем инкубируют с раствором NHS-dPEG4-биотина для биотинилирования свободных аминогрупп. Свободный NHS-dPEG4-биотин смывают, а биотинилированный IgG элюируют буфером, содержащим имидазол. Биотинилирование IgG на никель-хелатирующей смоле приводит к добавлению 3-5 молекул биотина на молекулу IgG.

Набор HOOK™ IgG для биотинилирования (амин) имеет преимущество перед стандартными реакциями биотинилирования, поскольку иммобилизация на никель-хелатирующей смоле позволяет быстро удалить несвязанный биотин и, следовательно, устраняет необходимость в дальнейшем диализе или обессоливании биотинилированного антитела.

Биотин, молекула массой 244 Да, проявляет исключительную аффинность связывания с авидином и стрептавидином (Ka=1015 M-1). Биотинилированные молекулы эффективно исследуются с помощью авидина или стрептавидина, конъюгированного с репортерными молекулами, такими как пероксидазы или фосфатазы. Популярным методом является использование меченных биотином белков в ELISA, вестерн-блоттинга и дот-блоттинга.

В комплект поставки входит колонка для хелатирования никеля, которую можно регенерировать до 10 раз, и наши одноразовые аликвоты NHS-dPEG4-биотина (структуру и реакцию сочетания см. в Приложении A). Наиболее широко используемыми реагентами для биотинилирования, реагирующими с амином, являются водонерастворимые эфиры N-гидроксисукцинимида (NHS) или водорастворимые эфиры N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-NHS). Добавление заряженного сульфоната (SO3-) к N-гидроксисукцинимидному кольцу сульфо-NHS эфиров приводит к их растворимости в воде (~ 10 мМ), но непроницаемости для плазматических мембран. Растворимость и непроницаемость для плазматических мембран делают их идеальными для изучения белков клеточной поверхности, поскольку они реагируют только с белковыми молекулами на внешней поверхности плазматических мембран. Реакции эфиров NHS и сульфо-NHS с аминами практически идентичны, приводя к образованию амидной связи и высвобождению NHS или сульфо-NHS.

Преимущество использования реагента для биотинилирования PEG (полиэтиленгликоль) заключается в том, что длинный гидрофильный спейсер передает свою растворимость в воде молекуле, с которой он связан. Это означает, что антитела и другие белки, меченные нашим NHS-dPEG4-биотином, имеют меньшую вероятность агрегации по сравнению с реакциями биотинилирования, не относящимися к PEG. HOOK™ Набор для биотинилирования (аминов) IgG предназначен для связывания 1–10 мг белка в 1 мл буфера, подходит для 8 связываний.

Также доступно: HOOK™ Биотинилирование IgG (сульфгидрил) для частичного восстановления и биотинилирования свободных сульфгидрильных остатков.

Особенности

• Более простое биотинилирование антител
• Технология Solid Support исключает очистку от диализа/обессоливания антител
• Подходит для антител 1–10 мг.
• PEG Биотиновый реагент для уменьшения стерических затруднений и повышения растворимости меченых антител.

Приложения

• Для эффективного и простого мечения антител биотином.