SAM-фтор: SAM Анализ метилтрансферазы G-Biosciences 786-431

Protocols.io предоставляет интерактивную версию этого протокола, где вы можете находить оптимизации и делиться ими с исследовательским сообществом.

Метилирование ключевых биологических молекул и белков играет важную роль во многих биологических системах, включая передачу сигнала, биосинтез, репарацию белков, подавление генов и регуляцию хроматина. S-аденозилметионин (SAM)-зависимые метилтрансферазы используют SAM, второй наиболее часто используемый ферментативный кофактор после ATP. SAM, также известный как AdoMet, действует как донор метильной группы, необходимой для модификации белков и DNA. Аберрантные уровни SAM связаны со многими отклонениями, включая болезнь Альцгеймера, депрессию, болезнь Паркинсона, рассеянный склероз, печеночную недостаточность и рак. Флуоресцентный анализ SAMfluor: SAM метилтрансферазы представляет собой непрерывный анализ, связанный с ферментами, который позволяет непрерывно контролировать SAM-зависимые метилтрансферазы без использования радиоактивных меток или измерений конечных точек. Удаление метильной группы из SAM приводит к образованию S-аденозилгомоцистеина (AdoHcy), который быстро превращается в S-рибозилгомоцистеин и аденин с помощью включенной нуклеозидазы AdoHcy. Это быстрое преобразование предотвращает накопление AdoHcy и его ингибирование по принципу обратной связи в реакции метилирования. Наконец, аденин превращается под действием адениндезаминазы в гипоксантин, который, в свою очередь, превращается в ураты и перекись водорода (H2O2). Скорость образования перекиси водорода измеряется с помощью 10-ацетил-3,7-дигидроксифеноксазина (ADHP), который образует высокофлуоресцентное соединение резоруфин. Производство резоруфина можно легко измерить при длине волны возбуждения 530–540 нм и длине волны излучения 585–595 нм. Стандартная кривая резоруфина создается на основе поставляемых стандартов. Анализ человеческой лизин-специфичной гистон-метилтрансферазы Set7/9 проводится с использованием 20 ММ TAF-10 в качестве акцепторного субстрата. В комплект поставки входит достаточное количество реагентов для анализа на 100 микролунках. Анализ поставляется с AdoHcy в качестве положительного контроля. Анализ можно адаптировать для использования с любой очищенной SAM-зависимой метилтрансферазой или очищенным ферментом, продуцирующим 5-аденозилгомоцистеин или 5’-метилтиоаденозин, благодаря специфичности нуклеозидазы AdoHcy. Также доступен колориметрический анализ SAM метилтрансферазы.
Особенности

• Кинетический анализ очищенных метилтрансфераз или скрининг ингибиторов метилирования.
• Непрерывный ферментный анализ для кинетических исследований.
• Флуоресцентный нерадиоактивный анализ.
• Поставляется со всеми реагентами, включая положительный контроль.
• Адаптируется для ферментов, генерирующих S-аденозилгомоцистеин или 5'-метилтиоаденозин.

Приложения

• Для кинетического анализа ферментов белка SAM метилтрансферазы.
• Идеально подходит для скрининга ингибиторов метилтрансферазы.

Описание	Размер	Кат. номер
SAMфтор: анализ SAM метилтрансферазы	100 анализов	786-431