Геномное выделение DNA (лаборатория 4H) G-Biosciences BE-317

Наши наборы для выделения геномного DNA поставляются с высушенной кишечной палочкой и всеми необходимыми предварительно аликвотными компонентами для выделения бактериального геномного DNA из бактерий и использования анализа нуклеиновых кислот G-Biosicences для определения количества экстрагированного DNA. Кроме того, включена демонстрация класса, чтобы продемонстрировать жизнеспособность поставляемых сушеных бактерий.

Следующее лабораторное задание адаптировано из «Лаборатории 4 часа: DNA Экстракция из бактерий» из книги «Биотехнология: Лабораторное руководство» Эллин Догерти. Для получения дополнительной информации о программе посетите сайт www.emcp.com/biotechnology. Этот комплект производится по лицензии Paradigm Publishing, Inc., подразделения New Mountain Learning.

Отрицательно заряженные молекулы DNA гидрофильны и хорошо растворяются в водных растворах. С другой стороны, заряженные молекулы DNA отталкиваются неполярными растворами, такими как спирт. Ученые используют эту особенность и используют спирт для выделения DNA путем осаждения (выделения) его из раствора. В этом наборе используется осаждение спиртом и центрифугирование для изоляции нитей DNA от других молекул, обнаруженных в клетках.

Возможно, вам приходилось наматывать пряди DNA из готовых растворов. Осаждение спиртом и наматывание DNA можно использовать для вытягивания длинных нитей DNA из раствора и обертывания их вокруг стеклянной палочки. Чем плотнее намотаны пряди вокруг стержня, тем больше воды выталкивается из раствора, и DNA вокруг стержня меняет вид липкой слизи на белые пряди. Чистый, сухой кристаллический DNA белого цвета.

В исследовательских лабораториях буферизация DNA не выполняется. Вместо этого выделение DNA проводится в микропробирках с использованием центрифугирования и осаждения спиртом. В ходе этой деятельности бактериальные клетки вскрываются с использованием буфера, содержащего детергент, а затем обрабатываются протеазой. Когда клетки бактерий лопаются, они выделяют DNA, а детергент и протеаза инициируют расщепление загрязняющих белков. Тепло и промывка с высоким содержанием соли денатурируют больше белковых примесей. С помощью центрифуги клеточные отходы гранулируются и выбрасываются. Геномный DNA плавает в надосадочной жидкости над отходами, его отбирают пипеткой и осаждают в чистый осадок с помощью спирта и высокоскоростного центрифугирования. Гранулированный DNA растворяют в буфере TE и хранят при -20°C для дальнейшего использования. Образцы очищенного геномного DNA можно изучать с помощью индикаторов или гель-электрофореза.

Действия

• Демонстрация жизнеспособных бактерий
• Изолировать геномный DNA из бактерий
• Используйте анализ для определения количества DNA.